نقد و بررسی
محیط کشت بلاد آگار بیس (Blood Agar Base) به صورت پودر محصول ایبرسکواستاستمحیط کشت بلاد آگار بیس (Blood Agar Base) به صورت پودر محصول ایبرسکو
کاربرد: تهیه محیط کشت بلاد آگار و چاکلت آگار برای شناسایی و کشت بسیاری از باکتری های سخت رشد، خصوصاً گونه های بیماری زا و نیز بررسی واکنش همولیز آن ها
استاندارد ها: APHA
آماده سازی محیط
1- 40 گرم از پودر محیط را در یک لیتر آب مقطر حل کنید. به آرامی حرارت دهید تا محیط کاملاً حل شود.
2- در دمای 121 درجه به مدت 15 دقیقه اتوکلاو کنید.
3- پس از اتوکلاو محیط را تا دمای 45 الی 50 درجه خنک کرده و به مقدار 4 الی 5 درصد خون دفیبرینه به آن افزوده و بخوبی مخلوط کنید.
4- قبل از افزودن خون، محیط آماده شده شفاف و به رنگ زرد-قهوه ای می باشد.
5- پلیت های آماده شده بلاد آگار را می توان به مدت سه ماه در یخچال نگهداری کرد.
آماده سازی محیط کشت بلاد آگار جوشیده (چاکلت آگار)
پس از افزودن خون به محیط پایه بلاد آگار، محیط کشت را به مدت 10 دقیقه در دمای 80 درجه جوشانده و هم زده شود تا رنگ آن قهوه ای شود (رنگ شکلاتی).
ترکیبات (گرم در لیتر)
peptone 20.0
sodium chloride 5.0
agar 15.0
pH نهایی محیط در 25 درجه= 0.2 ±6.8
فرآیند آزمایش
1- محیط کشت بلاد آگار را طبق دستورالعمل داده شده تهیه کنید. مقدار 5% خون دفیبرینه گوسفندی به محیط اضافه کنید.
2- نمونه مورد نظر را بر روی پلیت کشت داده و در دمای 2 ±35 درجه به مدت 18 الی 24 ساعت گرما گذاری کنید.
3- لازم به ذکر است جهت رشد باکتری های استرپتوکوک، محیط های کشت باید در انکوباتور حاوی 3 الی 5درصد دی اکسید کربن گرما گذاری شود.
کنترل کیفی
ظاهر محیط دهیدراته: پودری و یکنواخت
ظاهر محیط پایه و بدون خون آماده: زرد مایل به قهوه ای روشن
ظاهر محیط آماده همراه با 5% خون گوسفندی: قرمز آلبالویی، کدر
نتیجه کشت باکتری در شرایط هوازی پس از گرما گذاری در دمای 2±35 درجه به مدت 18 الی 24 ساعت:
| سوش استاندارد | ATCC | مقدار تلقیح CFU | رشد در محیط پایه | رشد در محیط خون دار | تست پاسیتراسین |
| candida albicans | 10231 | 30-300 | N/A | خوب، بدون همولیز | |
| listeria monocytogenes | 19115 | 30-300 | N/A | خوب، بتا همولیز | |
| pseudomonas aeroginosa | 10145 | 30-300 | خوب | N/A | |
| staphylococcus aureus | 25923 | 30-300 | خوب | خوب، بتا همولیز | |
| stereptococcus pneumoniae | 6301 | 30-300 | خوب | خوب، آلفا همولیز | – |
| stereptococcus pyogenes | 12344 | 30-300 | خوب | خوب، بتا همولیز | + |
نتیجه و تفسیر
مورفولوژی کلنی باکتری ها بر روی بلاد آگار حاوی 5% خون گوسفندی به شرح زیر می باشد:
- کلنی های باکتری های همولیتیک استرپتوکوک شفاف یا کدر و به رنگ خاکستری است. که به اندازه های کوچک (قطر 1 میلی متر) یا بزرگ و موکوئیدی (2 الی 4 میلیمتر) دیده می شوند که در اطراف آن ها هاله ای از همولیز تشکیل می شود.
- رنگ آمیزی گرم بایستی انجام شده و خصوصیات ماکروسکوپی بررسی شود.
- ( برخی ارگانیسم های دیگر مانند لیستریا ها، برخی کورینه باکتری ها، استافیلوکوک های همولیتیک، اشرشیا کلی و سودوموناس نیز واکنش همولیز دارند).
شرایط نگهداری:
پودر محیط، داخل قوطی کاملا در بسته و در دمای پایین تر از 30 درجه، و محیط آماده در دمای بین 2 تا 8 درجه نگهداری شود. بهترین زمان استفاده تا قبل از تاریخ انقضای درج شده بر روی برچسب محصول است.
هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.