نقد و بررسی
کیت اندازه گیری فعالیت گلوتامات دهیدروژناز (GDH) به روش کالریمتری و فلوریمتری، محصول کیازیستکیت اندازه گیری فعالیت گلوتامات دهیدروژناز
آنزیم گلوتامات دهیدروژناز (GDH) یک آنزیم مهم در چرخه های متابولیک و کاتابولیک می باشد که به صورت برگشت پذیر گلوتامات را به آلفا-کتوگلوتارات تبدیل می کند. این آنزیم در آسیب کبدی نکروتیک و مسمومیت آن در سرم دچار افزایش می شود و به صورت افتراقی هپاتیت ویروسی را از سایر آسیب های کبدی مشخص می کند.
در این کیت به صورت همزمان از روش کالریمتریک (طول موج 570 nm) و فلورومتریک ( Ex/Em=540/592 nm) فعالیت این آنزیم را به صورت دقیق پایش می نماید.
انواع نمونه
- سرم
- لیزات بافت
- لیزات سلولی
- مایعات بافتی
محتوایات کیت اندازه گیری فعالیت گلوتامات دهیدروژناز
| مقدار/تعداد | ماده | شماره |
| 5 mL | GDH Assay Buffer 10X | 1 |
| Powder | GDH Glutamate | 2 |
| 60 µL | GDH Developer | 3 |
| Lyophilized | NAD+ Co-substrate | 4 |
| 1 PCs | Kit Booklet | 5 |
| 1 PCs | 96-well Clean photometric Plate | 6 |
کیت اندازه گیری فعالیت گلوتامات دهیدروژناز
نحوه انجام آزمایش
**مقدار نمونه از 5-50 μL می تواند باشد و در قسمت محاسبه برای هر نمونه در فرمول قرار می گیرد. در صورتیکه از حجم کمتر از 50 میکرولیتر استفاده می کنید باقیمانده حجم را تا 50 میکرولیتر با GDH Assay Buffer 1X پر کنید (مثال: 27 μL نمونه را با 23 μL از GDH Assay Buffer 1X به حجم 50 μL برسانید و در هر چاهک بریزید. در این صورت مقدار نمونه در بخش محاسبه 27 μL خواهد بود).
1 . پس از آماده سازی مواد فوق در هر چاهک پلیت را به خوبی تکان دهید تا مواد مخلوط شوند.
2 . سپس در دمای اتاق و در تاریکی به مدت 5 دقیقه انکوبه کنید و جذب را در 570 nm (فلورومتریک Ex/Em=540/592 nm ) بخوانید و آن را A1 نامگذاری کنید. زمان آن نیز به عنوان T1 نامیده می شود.
3 . در ادامه در دمای 37 °C به مدت 30 تا 120 دقیقه (بسته به فعالیت آنزیم در نمونه) انکوبه کنید وجذب را مجددا در 570 nm (فلورومتریک Ex/Em=540/592 nm )بخوانید و آنرا A2 بنامید. زمان خوانش را نیز T2 نام گذاری کنید.
4 . توصیه می شود در صورت امکان خوانش ها به صورت کینتیک و هر 5 دقیقه یک بار انجام شود. سپس در محدوده ای که خوانش ها خطی می شوند جذب های A1-A2 و زمان های متناظر آن ها T1-T2 انتخاب شوند.
نحوه استفاده و نگهداری
- در دمای 4 درجه سانتی گراد نگهداری شود.
- حمل توسط یخ مرطوب صورت می گیرد.
- دستور کار محصول را مطالعه نمایید.
0دیدگاه