نقد و بررسی
کیت نیتریک اکساید نیتروسیب در دو حجم 100 و 200 تستی، محصولی از سیب زیست فنکیت نیتریک اکساید نیتروسیب در دو حجم 100 و 200 تستی، محصولی از سیب زیست فن
سنجش نیتریک اکساید به روش گریس
مقدمه:
نیتریک اکساید از اکسیداسیون درون سلولی L-آرژنین توسط نیتریک اکساید سنتتازها تولید می شود. نیتریک اکساید در بسیاری از فرآیندهای فیزیولوژیک از جمله تنظیم گشادی-تنگی عروق، ارتباط سلوله ای عصبی و پاسخ های ایمنی شرکت دارد.
نیتریک اکسید به شدت ناپایدار است و در اثر اکسیداسیون به نیترات و نیتریت تبدیل می شود. این کیت برای سنجش نیتریک اکسید از طریق اندازه گیری میزان نیتریت به روش رنگ سنجی گریس کاربرد دارد.
اساس روش گریس
روش گریس (Greiss) روشی است که برای سنجش یون نیتریت استفاده میشود.
معرف های گریس شامل دو جز مشتقات آنیلین و عامل جفت کننده (coupling agent) در یک محلول اسیدی هست. متداول ترین ترکیبی که استفاده می شود سولفانیل آمید و ان-(۱-نفتیل) اتیلن دی آمین است. این دیآمین، جایگزین ۱- نفتیل آمین ساده و ارزان تر شده است زیرا بر خلاف نفتیل آمین که مستعد سرطان زایی است کمخطر است و پیوندهای قطبیتری تشکیل می دهد که حلالیت بیشتری در محیط اسیدی دارد. از سایر مشتقات آنیلین قابل استفاده می توان به سولفانیلیک اسید، نیتروآنیلین و آمینو استوفنون اشاره کرد. این فرآیند دو مرحلهای است. طی مرحله اول واکنش گریس، نیتریت با اسید سولفانیلیک واکنش داده و یون دی آزونیوم تولید می کند. در مرحله دوم واکنش، این یون با ترکیب ان-(۱-نفتیل) اتیلن دی آمین جفت شده و ترکیبی از مشتقات آزو به رنگ صورتی تولید می کند.
خلاصه دستورالعمل استفاده از کیت
پروتکل کیت به شرح زیر خلاصه شده است:
۱- هنگام انجام آزمایش نمونه را به دمای اتاق برسانید. در صورت لزوم نمونه ها را با بافر رقیق کنید.
۲- مقدار ۱۰۰ میکرولیتر از نمونه ها را با تکرار ۳ تایی در هر چاهک پلیت ۹۶ خانه بریزید.
۳- برای تهیه معرف سنجش کیت نیتریک اکساید به اندازه ۹۶ چاهک (یک پلیت)، مقدار ۵ میلی لیتر از Reagent A را با مقدار ۵ میلی لیتر از Reagent B در Mixing bottle مخلوط کنید و به آرامی هم بزنید تا محلول یکنواخت شود.
۵- برای افزایش پایداری محلول سدیم نیتریت استاندارد این محلول با غلظت ۵۰x تهیه شده است. ابتدا طبق دستورالعمل کیت، آن را به غلظت x۱ (۲mg/ml) برسانید. سپس ۸ سری رقت ۱/۲ از استاندارد تهیه کنید.
۶- به هر چاهک از پلیت ۱۰۰ میکرولیتر نمونه استاندارد، Blank یا نمونههای تست اضافه کنید.
۷- به هر چاهک ۱۰۰ میکرولیتر از معرف را اضافه کنید. با دست یا با استفاده از شیکر کمی تکان دهید تا یکنواخت شود.
۸- با استفاده از میکروپلیت ریدر، جذب نمونهها را در ۵۷۰ نانومتر بخوانید.
نکات کلیدی
- دقت کنید هنگام برداشتن محلول، Reagent A و Reagent B در ظروف اصلی با هم مخلوط نشود.
- دقت کنید که اگر می خواهید در چند نوبت سنجش نیتریک اکساید را انجام دهید؛ یکباره همه Reagent A و Reagent B را با هم مخلوط نکنید. چون پس از مخلوط شدن، به شرط نگهداری در تاریکی تنها یک ماه قابل استفاده خواهد بود.
هنوز بررسیای ثبت نشده است.