نقد و بررسی
کیت اندازه گیری فعالیت آنزیم کاسپاز 3 و 7 به روش کالریمتری، محصول کیازیستکیت اندازه گیری فعالیت آنزیم کاسپاز 3 و 7
کاسپازها آنزیم های پروتئاز داخل سلولی هستند که در مرگ برنامه ریزی شده سلول (آپوپتوز، نکروپوتوز و پایروپتوز) و التهاب نقش اساسی دارند. کاسپاز 3 و 7 نقش اجرایی داشته (Executioner) و در هر دو مسیر داخلی و خارجی آپوپتوز نقش اساسی ایفا می کند.
در این کیت آنزیم موجود در نمونه در معرض سوبسترای کالریمتریک و مشترک هر دو آنزیم کاسپاز 3 و 7 قرار می گیرد. سپس این آنزیم سوبسترای متصل به کروموژن را شکسته و تولید رنگ زرد کرده که در طول موج 405 nm جذب دارد. به دلیل مشترک بودن سوبسترای کاسپاز 3 و 7 امکان اندازه گیری فعالیت مجزای این دو آنزیم وجود ندارد.
محتویات کیت اندازه گیری فعالیت آنزیم کاسپاز 3 و 7
| مقدار/تعداد | ماده | شماره |
| 5 mL | Caspase 3 Buffer | 1 |
| 500 µL | Caspase Substrate (DEVD-pNA) | 2 |
| 100 mL | Caspase Lysis Buffer | 3 |
| 100 µL | Caspase Standard (pNA) 5 mM | 4 |
| Powder | DTT | 5 |
| Lyophilized | Positive Control | 6 |
| 1 PCs | Kit Booklet | 7 |
| 1 PCs | 96-well Clean photometric Plate | 8 |
انواع نمونه
- لیزات سلولی
- عصاره بافتی
کیت اندازه گیری فعالیت آنزیم کاسپاز 3 و 7
– پس از آماده سازی نمونه موارد زیر را آماده کنید.
– همه محلول ها در دمای اتاق گرم شوند.
– همه ویال ها قبل از انجام آزمایش اسپین شوند تا محتویات روی دیواره ها و در باقی نماند .
– Caspase Substrate (DEVD-pNA) : آماده مصرف می باشد. در دمای -20 °C ذخیره شود. ترجیحا به مقادیر مساوی تقسیم بندی و ذخیره شود .
– DTT Solution : به ویال DTT پانصد میکرولیتر آب دیونیزه اضافه کنید.
باقیمانده را در دمای °C -20 ذخیره کنید .
– Positive Control : به ویال Positive Control مقدار یک میلی لیتر از Caspase Lysis Buffer اضافه کنید. سپس تقسیم بندی کرده و در دمای -20 °C ذ خیره نمایید .
موار د اضافی مورد نیاز
- ست سمپلر متغیر و چند کاناله
• سرسمپلر مناسب
• میکروتیوب 1.5 میلی لیتری
• سانتریفیوژ دور بالا (12000 RPM)
• دستگاه Plate Reader با طول موج 400-420 نانومتر
• پیشنهادی: بافر استخراج آنزیم کیازیست (KEXT50). در صورت استفاده از بافر موجود در کیت حتما بافت توسط نیتروژن مایع و یا هموژنایزر، هموژن شود.
• پیشنهادی: مهار کننده پروتئازها (پیشنهادی کیازیست KPI100 )
نکته: قبل از شروع، آزمایش با یک نمونه جهت مشخص ساختن مقدار نمونه به صورت پایلت به همراه یک استاندارد انجام شود .
• قبل از انجام تست کل پروتکل را بخوانید .
• انجام آزمایش به صورت پایلت حتما توصیه می شود .
نحوه استفاده و نگهداری
- در دمای 4 درجه سانتی گراد نگهداری شود.
- حمل توسط یخ مرطوب صورت می گیرد.
- دستور کار محصول را مطالعه نمایید.
0دیدگاه