نقد و بررسی
کیت استخراج اگزوزوم از سرم و مایعات بیولوژیک (اگزوسیب Exocib S) محصول سیب زیست فنکیت استخراج اگزوزوم از سرم و مایعات بیولوژیک (اگزوسیب Exocib S) محصول سیب زیست فن
برای مشاهده مقالات چاپ شده با این کیت، کلمه “EXOCIB” را در google scholar جستجو کنید.
اگزوزوم ها وزیکول های خارج سلولی کوچک در ابعاد نانو هستند که توسط سلول ها ترشح می شوند و اسیدهای نوکلئیک، پروتئین ها، لیپیدها و سایر مواد فعال زیستی را حمل می کنند. اگزوزوم ها در روند فیزیولوژیک و آسیب شناسی بدن نقش دارند.
در مقایسه با حامل های مصنوعی مانند لیپوزوم ها و نانوذرات، درون زایی و نا همگنی اگزوزوم ها به آن ها مزایای گسترده و منحصر به فردی در زمینه تشخیص و درمان بیماری می دهد. با این حال، ویژگی هایی مانند ناپایداری در حالت ذخیره سازی، عملکرد کم، خلوص پایین و توانایی کم آن ها برای تارگتینگ، کاربرد بالینی آن ها را محدود می کند.
پرکاربرد ترین و اساسی ترین روش برای جداسازی اگزوزوم ها از انواع نمونه های انسانی، سانتریفیوژ افتراقی است. اصل این روش، جدا کردن اگزوزوم ها از سایر مواد موجود در نمونه بر اساس حجم و خصوصیات فیزیکی آن ها است.
خلاصه دستورالعمل استفاده از کیت
پروتکل کیت به شرح زیر خلاصه شده است:
۱- نمونه را به مدت ۱۰ دقیقه با دور ۳۰۰۰RPM سانتریفیوژ کنید تا دبری‌ها و ذرات درشت را حذف کنید.
۲- می توانید برای نتیجه بهتر نمونه را با فیلتر ۰/۲۲ یا ۰/۴۵ میکرومتر فیلتر کنید.
۳- معرف A را در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد گرم کنید و ورتکس کنید.
۴- معرف A را به نسبت ۱ به ۵ با نمونه ترکیب کنید. (نمونه ۵ حجم: معرف ۱ حجم)
۵- ترکیب را به مدت ۵ دقیقه ورتکس کنید تا به خوبی مخلوط شود. (در این مرحله، حالت ابری مشاهده می‌شود.)
۶- حدود ۱۲ ساعت ترکیب را در دمای ۴ درجه سانتیگراد نگهداری کنید. (برای حصول نتیجه بهتر، در طی این مدت هر ۱ ساعت تیوب محتوی ترکیب را چند بار تکان بدهید تا مخلوط شود.)
۷- تیوب را ۱ دقیقه ورتکس کنید.
۸- ترکیب را به مدت ۴۰ دقیقه با دور ۳۰۰۰RPM سانتریفیوژ کنید.
۹- روماند را به طور کامل جدا کنید و رسوب را با ۵۰ تا ۲۰۰ میکرولیتر از معرف B تعلیق کنید.
نکات کلیدی
* اگزوزوم تخلیص شده را تنها برای چند روز می‌توان در ۴ درجه سانتیگراد نگهداری کرد. برای ماندگاری طولانی مدت در فریزر ۲۰- یا ۸۰- نگهداری کنید.
عیب یابی
- مشاهده کریستال در معرف A:
اگر در معرف A کریستال مشاهده کردید، تا دمای ۴۵ درجه معرف را گرم کنید و هم بزنید تا کریستال‌ها از بین برود.
- بعد از سانتریفیوژ نهایی پلتی مشاهده نمی‌شود:
زمانی که مقدار کلی اگزوزوم کم باشد، یا از حجم اولیه کمی برای استخراج اگزوزوم استفاده کرده باشید، ممکن است اگزوزوم استخراج شده با قابل رویت نباشد.
ویژگی های کیت استخراج اگزوزوم از سرم:
- برای استخراج از 100ml و 450ml سرم و مایعات بیولوژیک
- بدون نیاز به اولتراسانتریفیوژ
- صرفه جویی در هزینه
- تکرار پذیری بالا و صرف زمان کمتر
- دمای نگهداری در 4 درجه سانتیگراد
- تاریخ انقضا 6 ماه
هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.