نقد و بررسی
کیت اندازه گیری فعالیت میلو پراکسیداز (MPO) به روش کالریمتری، محصول کیازیستکیت اندازه گیری فعالیت میلو پراکسیداز (MPO) به روش کالریمتری، محصول کیازیست
آنزیم میلو پراکسیداز (Myeloperoxidase) به طور عمده در نوتروفیل ها وجود دارد و مسئول خاصیت ضد میکروبی آنها در ایمنی ذاتی می باشد. این آنزیم حاوی گروه هم (Heme) که جایگاه اصلی آن در لیزوزوم هاست می باشد و با تولید ماده به شدت واکنش گر هایپوکلر (HClO)، باکتری ها و سایر پاتوژن ها را از بین می برد. در این کیت فعالیت آنزیم پس آماده سازی در طول موج 405 nm به صورت کاهشی قابل اندازه گیری می باشد.
انواع نمونه
- بافت
- گلوبول های سفید
- سلول ها
- سرم و پلاسما
محتویات کیت اندازه گیری فعالیت میلو پراکسیداز
| مقدار/تعداد | ماده | شماره |
| 5 mL | MPO Buffer 10X | 1 |
| 50 µL | MPO Substrate | 2 |
| 100 µL | MPO DTNB | 3 |
| 60 µL | DTT | 4 |
| 100 µL | Stop Reagent | 5 |
| 2 PCs | 96-well Clean photometric Plate | 6 |
کیت اندازه گیری فعالیت میلو پراکسیداز
-نمونه ها باید در محدوده جذب منحنی استاندارد قرار بگیرند .
-بنا به دلایل آماری هر نمونه باید حداقل به صورت دوتایی ) Duplicate ( انجام شود.
-از چاهک ها میانگین گرفته و میزان جذب میانگین A را از تمامی نمونه ها و استاندارد ها کم کنید .
-اگر از کنترل نمونه استفاده کرده اید، میانگین جذب کنترل هر نمونه را از میانگین جذب نمونه ها کم کنید .
-توسط نرم افزار Excel و یا Curve Expert Basic منحنی استاندارد را رسم کرده و غلظت هر نمونه را از روی منحنی و معادله آن محاسبه کنید.
-می توان میزان پروتئین هر نمونه را اندازه گیری کرد و مقادیر به دست آمده از هر نمونه را بر اساس آن نرمال سازی کرد که در این صورت واحد به صورت mU/mg of protein گزارش می شود .
موارد اضافی مورد نیاز
- ست سمپلر متغیر و چند کاناله
• سرسمپلر مناسب
• میکروتیوب 1.5 میلی لیتری
• سانتریفیوژ دور بالا (12000 RPM)
• دستگاه Plate Reader با طول موج 400-420 نانومتر
• پیشنهادی: بافر استخراج آنزیم کیازیست (KEXT50). در صورت استفاده از بافر موجود در کیت حتما بافت توسط نیتروژن مایع و یا هموژنایزر، هموژن شود.
• پیشنهادی: مهار کننده پروتئازها (پیشنهادی کیازیست KPI100 )
نکته: قبل از شروع، آزمایش با یک نمونه جهت مشخص ساختن مقدار نمونه به صورت پایلت به همراه یک استاندارد انجام شود .
• قبل از انجام تست کل پروتکل را بخوانید .
• انجام آزمایش به صورت پایلت حتما توصیه می شود .
نحوه استفاده و نگهداری
- در دمای 4 درجه سانتی گراد نگهداری شود.
- حمل توسط یخ مرطوب صورت می گیرد.
- دستور کار محصول را مطالعه نمایید.
0دیدگاه