نقد و بررسی
محیط کشت EMB آگار (EMB Agar) به صورت پودر محصول ایبرسکومحیط کشت ائوزین متیلن بلو آگار یا EMB آگار (Eosin Methylene Blue) به صورت پودر محصول ایبرسکو
کاربرد: محیطی انتخابی جهت جداسازی و افتراق باکتری E.coli و Enterobacter و همچنین شناسایی سریع Candida albicans
استانداردها: APHA, USP
آماده سازی محیط EMB آگار
1- 36 گرم از پودر محیط را در یک لیتر آب مقطر حل کنید.
2- به آرامی حرارت داده و به مدت چند ثانیه بجوشانید تا محیط به طور کامل حل شود.
3- محیط کشت را در دمای 121 درجه و به مدت 15 دقیقه اتوکلاو کنید.
4- محیط را تا 60 درجه خنک کنید و به خوبی تکان دهید تا هم متیلن بلو داخل محیط اکسیده شود (یعنی رنگ آبی خود را بازیابد) و هم رسوب داخل محیط، که بخش مهمی از محیط است، دوباره شناور گردد.
5- محیط را در پلیت پخش کنید.
ترکیبات EMB آگار (گرم در لیتر):
Peptones 10.0
Lactose 10.0
Di-potassium Hydrogen Phosphate 2.0
Eosin Y (yellowish) 0.4
Methylene Blue 0.065
Agar 13.5
pH نهایی محیط در 25 درجه = 0.2±7.0
فرآیند آزمایش
- نمونه ها را به روش اسپیریدینگ در سطح پلیت تلقیح کنید.
- پلیت ها را به مدت 18 الی 24 ساعت در دمای 35 درجه گرما گذاری کنید. از تابش نور به پلیت ها جلوگیری کنید. چنانچه نتایج کشت پس از 24 ساعت منفی بود، پلیت ها را مجدداً به مدت 24 ساعت دیگر گرما گذاری کنید.
کنترل کیفی EMB آگار
ظاهر پودر: پودری، یکدست و به رنگ صورتی-قرمز که ممکن است دانه های قرمز رنگی همراه داشه باشد.
ظاهر محیط آماده: کمی کدر و به رنگ سبز نارنجی قهوه ای.
نتیجه کشت باکتری در شرایط بی هوازی پس از گرما گذاری در دمای 2±35 درجه به مدت 18 الی 24 ساعت:
| سوش استاندارد | ATCC | مقدار تلقیح | رشد | رنگ کلنی | جلای فلزی |
| Escherchia coli | 25922 | 1000-10000 | خوب/خیلی خوب | آبی | + |
| Escherchia coli | 11775 | 1000-10000 | خوب/خیلی خوب | آبی | + |
| Enterobacter cloacae | 13047 | 1000-10000 | خوب/خیلی خوب | آبی کمرنگ | – |
| Shigella sonnei | 11060 | 1000-10000 | خوب/خیلی خوب | – | – |
| Salmonella typhimurium | 14028 | 1000-10000 | خوب/خیلی خوب | – | – |
| Staphylococcus aureus | 25923 | 10000-100000 | رشد ضعیف/عدم رشد | – | – |
نتیجه و تفسیر:
کلیفرم ها از جمله باکتری های گرم منفی تخمیر کننده لاکتوز هستند که به علت شرایط اسیدی که در اثر رشد و تخمیر قند توسط آن ها در محیط کشت EMB بوجود می آید، موجب واکنش رنگ های موجود در این محیط کشت می شود و نهایتاً باعث ایجاد جلای فلزی سبز رنگ در کلنی این باکتری ها بر روی این محیط کشت می شود.
خصوصیات تیپیک ظاهری برخی از کلیفرم ها بر روی این محیط کشت به شرح زیر می باشد:
- باکتری Escherchia coli دارای کلنی های بزرگ آبی-سیاه با جلای فلزی می باشد.
- با کتری های Enterobacter/Klebsiella کلنی های بزرگ و موکوئیدی به رنگ آبی-سیاه تولید می کنند.
- باکتری های Proteus، Salmonella و Shigella دارای کلنی های بزرگ و بی رنگ می باشند.
- باکتری Pseudomonas کلنی هایی با اشکال نامنظم و بی رنگ خواهند داشت.
نکات:
- برخی از سویه های سالمونلا و شیگلا، به دلیل حضور ائوزین و متیلن بلو در ترکیب این محیط رشد نمی کنند.
- برخی از سویه های باکتری های گرم مثبت مانند انتروکوک ها، استافبلوکوک ها و مخمرها می توانند بر روی این محیط رشد کرده و کلنی های سر سوزنی تولید کنند.
- باکتری های غیر بیماریزای غیر تخمیر کننده لاکتوز نیز ممکن است بتوانند بر روی این محیط رشد کنند. بنابراین برای شناسایی دقیق تر این ارگانیسم ها از سویه های بیماریزا بایستی از برخی از تست های بیوشیمیایی نیز استفاده کرد.
شرایط نگهداری
پودر محیط، داخل قوطی کاملا در بسته و در دمای پایین تر از 30 درجه، و محیط آماده در دمای بین 2 تا 8 درجه نگهداری شود. بهترین زمان استفاده تا قبل از تاریخ انقضای درج شده بر روی برچسب محصول است.
هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.