نقد و بررسی
کیت اندازه گیری فعالیت آنزیم گلوتاتیون پراکسیداز (GPx) به روش کینتیک، محصول کیازیستکیت اندازه گیری فعالیت آنزیم گلوتاتیون پراکسیداز کیازیست
گلوتاتیون پراکسیداز (GPx) از آنزیم های آنتی اکسیدانیمی باشد که با تبدیل هیدروژن پراکسید به آب و استفاده همزمان از گلوتاتیون در جلوگیری از استرس اکسیداتیو موثر است. هشت ایزوفرم از این آنزیم شناخته شده است که در پستانداران به سلنیوم وابسته می باشند. سطوح پایین آن با دیابت تیپ 2 و نفروپاتی دیابتی، Multiple Sclerosis و سلیاک همراه بوده است.
در این کیت از واکنش جفت شونده (Coupling) در کنار آنزیم گلوتاتیون ردوکتاز و کوآنزیم آن NADPH استفاده می شود.
انواع نمونه
- انواع بافت حیوانی و انسانی
- سلول
- سرم
- پلاسما
- مایعات بیولوژیک
نحوه انجام آزمایش
**مقدار نمونه از 1-50 μL می تواند باشد و در قسمت محاسبه برای هر نمونه در فرمول قرار می گیرد. در صورتیکه از حجم کمتر از 50 میکرولیتر استفاده می کنید باقیمانده حجم را تا 50 میکرولیتر با GPx Buffer 1X پر کنید (مثال: 27 μL نمونه را با 23 μL از GPx Buffer 1X به حجم 50 μL برسانید و در هر چاهک بریزید. در این صورت مقدار نمونه در بخش محاسبه 27 μL خواهد بود).
1 . پس از آماده سازی مواد فوق در هر چاهک پلیت را به خوبی تکان دهید تا مواد مخلوط شوند.
2 . سپس در دمای اتاق و در تاریکی به مدت 15 دقیقه انکوبه کنید.
نکته: فعالیت آنزیم در دمای 37°C بیشتر خواهد بود. در دمای محیط 10 % از فعالیت آنزیم کم می شود.
3 . μL 10 از Working Solution 2O2H را توسط سمپلر چند کاناله داخل همه چاهک ها ریخته و به خوبی هم بزنید تا واکنش بلافاصله آغاز شود .
4 . سپس جذب را بلافاصله در 340 nm به مدت کلی 5 دقیقه و هر یک دقیقه (حالت Kinetic ) بخوانید.
نکته: جذب به صورت کاهشی در هر دقیقه خواهد بود. بهترین نقاط برای محاسبه جاییست که کاهش جذب به صورت خطی باشد.
نحوه استفاده و نگهداری کیت اندازه گیری فعالیت آنزیم گلوتاتیون پراکسیداز کیازیست
- در دمای منفی 20 درجه سانتی گراد نگهداری شود.
- حمل توسط یخ مرطوب صورت می گیرد.
0دیدگاه